影響質(zhì)粒DNA細胞轉染效率因素
1、質(zhì)粒大小和轉染量：在一般情況下，隨插入片段長(cháng)度的增加轉染效率降低；而轉染效率在一定的范圍內與質(zhì)粒轉染量呈正相關(guān)。
2、DNA質(zhì)量：高質(zhì)量的DNA對于轉染的效率至關(guān)重要。如果質(zhì)粒不純會(huì )顯著(zhù)影響轉染復合物的形成，進(jìn)而影響轉染效率。因此，可以選擇提取純度較高的試劑盒對DNA進(jìn)行提取和純化，以得到更高質(zhì)量的DNA，從而提高轉染效率。
3、轉染試劑的選擇：轉染試劑將外源核酸片段導入細胞，影響內源基因表達水平。在轉染實(shí)驗前應根據實(shí)驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑，例如在綿羊成纖維細胞轉染過(guò)程中FuGene HD的轉染效率更高，GenEscortTM I對小鼠膠質(zhì)細胞則具有更好的轉染效果?？傊?，可以遵循高效、低毒等原則進(jìn)行選擇。
4、質(zhì)粒與轉染試劑比例：在一定范圍內，轉染效率與質(zhì)粒/轉染試劑比值成正相關(guān)，但毒性也會(huì )增加?？梢愿鶕D染試劑推薦比例確定合適的合適的轉染比例。
5、細胞狀態(tài)：維持細胞生長(cháng)及健康旺盛是提高轉染效率的重要條件。建議選擇對數生長(cháng)期的細胞為佳，此時(shí)期的細胞生長(cháng)旺盛，可能得到更高的轉染效率，切勿選擇傳代次數過(guò)多，基因型可能發(fā)生改變的細胞。
6、細胞密度：細胞密度過(guò)高或過(guò)低都會(huì )影響轉染效果，過(guò)高則難以轉染，過(guò)低則容易導致細胞死亡，因此需要選擇合適的細胞融合密度進(jìn)行轉染，一般來(lái)說(shuō)細胞密度在60%-80%時(shí)轉染較為理想，但具體密度可參考轉染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
7、血清：血清中含有大量的蛋白質(zhì)，可能會(huì )降低轉染效率。一般的轉染試劑會(huì )要求轉染時(shí)使用無(wú)血清培養基進(jìn)行轉染，轉染完成后更換wan全培養基。但現在有些新的轉染試劑血清的存在已不造成威脅，甚至還有助于提高轉染效率，如陽(yáng)離子聚合物等。
8、抗生素：抗生素，如青mei素和鏈mei素，一般是作為培養基中的添加物來(lái)防止細胞污染。這些抗生素對于真核細胞沒(méi)有毒性，但是轉染時(shí)有些轉染試劑增加了細胞的通透性使抗生素進(jìn)入細胞，可能會(huì )間接導致細胞死亡，從而降低轉染效率?？梢愿鶕D染試劑的要求來(lái)選擇是否在培養基中添加抗生素。
質(zhì)粒DNA細胞轉染注意事項
線(xiàn)性化還是超螺旋會(huì )影響轉染結果：超螺旋質(zhì)粒的轉染效率比線(xiàn)性DNA高得多，特別是瞬時(shí)轉染。而線(xiàn)性化DNA轉染的整合幾率高。質(zhì)粒太大了轉染會(huì )困難一些。畢竟，相對致密、較小的外源異物被細胞內吞的幾率要大一些。
如果你的質(zhì)粒正好比較大，又沒(méi)有經(jīng)驗，選擇特別注明可以轉大質(zhì)粒的轉染試劑成功幾率會(huì )高一些。有的轉染試劑還會(huì )提供一些促進(jìn)DNA凝聚的成分，使得DNA形成轉染復合物時(shí)更致密一些，更容易轉染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會(huì )影響轉染效率，一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒。
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